什么是酶的回收率及纯化倍数
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发布时间：2009-06-10 09:20:45
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食品添加剂糖化酶制剂的发酵制取技术
作者:| 来源:中国食品科技网| 编辑:王治华|2006-6-23| 点击:242
本标准适用于由发酵法生产,经提纯制取,供食品生产作添加剂用的糖化酶制剂。 休 闲 居 编 辑
1、技术要求
1.1外观:固体时,粉状,无结块。液体时,黄褐色,允许有少量凝集物
1.2项目和指标表1
项目 指标
固体 30000,40000,20000,30000
液体 50000,60000,40000,50000
酶活力,u/g(ml)80000,100000,60000,80000
150000,200000,
水分,％不小于8.0
细度(通过40目铜网筛)％不小于80
酶活力保存率(室温,半年),％不小于80
重金属(以pb计),％不超过0.004
铅,％不超过0.001
砷(以as计),％不超过0.0003
黄曲霉毒素b1,％不超过0.0000005
大肠菌群,个/100g(ml)不超过30
沙门氏菌不得检出
2、试验方法
2.1外观:用目视判定。
2.2酶活力测定
2.2.1试剂
2.2.1.10.1n乙酸-乙酸钠缓冲溶液(ph4.6):称取6.7g乙酸钠(ch3coona·3h2o),吸取冰乙酸2.6ml,用蒸馏水溶解定容至1000ml,上述缓冲溶液应以酸度计校正ph值。
2.2.1.20.05n硫代硫酸钠溶液:按gb601《化学试剂标准溶液制备方法》中2.7执行。
2.2.1.30.1n碘液:按gb601《化学试剂标准溶液制备方法》中2.10执行。
2.2.1.40.1n氢氧化钠溶液:按gb601《化学试剂标准溶液制备方法》中2.2执行。
2.2.1.52n硫酸溶液:量取分析纯浓硫酸(比重1.84)5.6ml缓缓加入适量蒸馏水中,冷却后用蒸馏水定容至100ml,摇匀。
2.2.1.620％氢氧化钠溶液:称取20g分析纯氢氧化钠,用蒸馏水溶解定容至100ml。
2.2.1.72％可溶性淀粉溶液:称取可溶性淀粉2.00g,然后用少量蒸馏水调匀,徐徐倾入已沸的蒸馏水中,煮沸至透明,冷却,用蒸馏水定容至100ml,此溶液需当天配制。注:可溶性淀粉应符合hg3-3095质量标准要求。
2.2.2测定程序
2.2.2.1待测酶液的制备:称取酶粉2.0000g(或1.00ml酶液),倒入50ml烧杯中,用少量的乙酸-乙酸钠缓冲溶液(ph4.6)溶解,并用玻璃棒捣碎,将上层清液小心倾入适当的容量瓶中,沉渣再加入少量上述缓冲溶液,如此反复捣研3～4次,最后全部移入容量瓶中,用缓冲溶液定容至刻度,摇匀,通过4层纱布过滤。再用滤纸滤清,滤液供测定用。浓缩酶液可直接吸取一定量于容量瓶中,用缓冲溶液稀释定容至刻度。注:制备酶液时,酶液浓度最好控制在消耗0.05n硫代硫酸钠(空白-样品)的差数为3～6ml左右(以每毫升酶活力约50～90单位为宜)。
2.2.2.2测定:于甲、乙两支50ml比色管中,分别加入2％可溶性淀粉溶液25ml,0.1m乙酸-乙酸钠缓冲溶液(ph4.6)5ml,摇匀。于40±0.2℃的恒温水浴中预热5～10min。在甲管中加入酶制备液2.0ml(酶的总活力约110～170单位)立即记时,摇匀。在此温度下准确反应1h后,立即在甲、乙两管各加20％氢氧化钠溶液0.2ml,摇匀,将两管取出迅速用水冷却,并于乙管中补加酶制备液2.0ml(作为对照)取两管中上述反应液各5ml放入碘量瓶中,准确加入0.1n碘液10ml,再加0.1n氢氧化钠溶液15ml(边加边摇晃),放置暗处15min,加入2n硫酸2ml,用0.05n硫代硫酸钠溶液滴定至无色为终点。
2.2.2.3计算1g酶粉或1ml酶液在40℃、ph4.6的条件下,1h分解可溶性淀粉产生1mg葡萄糖的酶量为一个酶活力单位。
132.2
x＝(a-b)×n×90.05×━━×━━×n………………(1)
25
式中:x--酶活力单位,μ/g(ml);a--空白试验消耗硫代硫酸钠溶液的毫升数;b--样品消耗硫代硫酸钠溶液的毫升数;n--硫代硫酸钠溶液的当量浓度;n--稀释倍数;90.05--1ml1n硫代硫酸钠相当葡萄糖毫克数;1/2--折算成1ml酶液的量;32.2--反应液总体积,毫升数;5--吸取反应液的毫升数。为计算方便,可按稀释倍数参考表计算,系数乘以滴定空白和样品所消耗0.05n硫代硫酸钠溶液的差值(a-b)为酶活力单位。稀释倍数参考表2。
表2 稀释倍数参考表
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